抗乙酰胆碱受体抗体（AchR-Ab） 组合检查

　　抗乙酰胆碱受体抗体主要为IgC型(以IgCl、IGC.2亚类为主，IgC.亚类次之)，可检测到IgM型。不同类型的MG病人血清抗AchR抗体具有不同性质。抗AchR抗体的检测方法最先使用的是放射免疫，以后，为避免使用核素，各种酶联免疫法应运而生。这些检测方法中都要应用。·银环蛇毒素(a-bungarotoxin，a-BT)：a-BT是从银环蛇毒液中提取的一种肽类，分子量为8kD左右。它能高度选择性与AchR结合，这种结合几乎是不可逆的。如用ELISA法，可用ct-BT预先包被固相载体，然后利用其特异性吸附加入的AchR，再测定待测血清中的抗AchR抗体。ELISA法简便易行，便于推广，故将其介绍如下。

　　1.试剂 ①a-BT：可购得商品;②AchR：取人骨骼肌200—250g，用生理盐水洗净，加入湿重2倍量的缓冲液，高速匀浆90s后20 000Xg离心30rain。除去上清(血液、脂质)，加入湿重2倍量的缓冲液，再次匀浆。向其中加入TritonX-100至最终浓度为2%，4℃搅拌过夜。100 000Xg离心1h，上清即为AchR。也可购买商品;③HRP标记的抗人IgC。

　　2.操作步骤

　　(1)用包被液将ct-BT稀释为最适浓度(用方阵滴定法选出)，包被聚苯乙烯反应板，每孔200pL(含ct-BT约为2.5pmol/L)。4℃过夜后用洗涤液洗3次，每次3min(以下同)。

　　(2)将AchR用稀释液适当稀释，加至包被孔中，每孔200btL(0.2pm01)，37~C1h。同上洗涤。

　　(3)力[1X适当稀释的待测血清，每孔200gL，37℃30min。同上洗涤。

　　(4)加入最适工作浓度的HRP标记抗人IgC，37℃30rain。同上洗涤。

　　(5)加入底物溶液(OPD-H202)每孔200L，37℃ 30min，mol/LH2S04终止反应。

　　3.结果观察 于酶标仪上测492nm吸光度。以阳性混合血清作为标准血清，制备标准曲线。待测血清中抗AchR抗体含量，可根据吸光度从标准曲线上换算。